ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞

對活細(xì)胞影響少，適用于長時間成像的ER染色試劑

本產(chǎn)品是活細(xì)胞成像用的不可逆ER染色試劑。與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記 Glibenclamide系ER染色試劑相比，對細(xì)胞功能的藥理作用小，由于其不可逆性，更換培養(yǎng)基后也可進(jìn)行觀察。

※ 本產(chǎn)品是 funakoshi 基于京都大學(xué)工學(xué)研究科浜地格教授·田村朋則講師的研究成果商品化的產(chǎn)品。

※ 本產(chǎn)品僅供研究使用。

◆現(xiàn)有 ER 染色試劑的問題點(diǎn)以及 ERseeing 的優(yōu)勢

過去通用的 ER 染色試劑是將熒光染料附著于在ER中特異表達(dá)的 K⁺ 通道拮抗劑 Glibenclamide 上，并廣泛用于 ER 的可視化。然而，由于以下的問題，應(yīng)用范圍有限。

●  由于 Glibenclamide 的藥理效果，通道活性被抑制，對細(xì)胞的影響大。

●  由于是可逆的拮抗劑，因此通過培養(yǎng)基交換等的清洗操作非常容易去除。

與之相對的，ERseeing 是一種新型ER染色試劑，具有與Rhodol綠色熒光染料相連的蛋白標(biāo)記基團(tuán)，對 ER 膜成分具有很高的親和力。通過選擇性地集中在 ER 上并用熒光基團(tuán)標(biāo)記 ER 蛋白，可以進(jìn)行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更換含有 FBS 的培養(yǎng)基，因此可應(yīng)用于任何的培養(yǎng)基和試劑處理環(huán)境下的長期成像。

◆原著論文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

◆特點(diǎn)

●  激發(fā)/熒光波長：509 nm/524 nm

    ※  可利用一般的綠色色素FTIC的觀察條件

●  與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記 Glibenclamide 系染色試劑相比，可以很好地抑制對細(xì)胞的影響。

●  即使培養(yǎng)基中含有 ERseeing 也可以進(jìn)行觀察。

    ※  如果在培養(yǎng)基中長時間染色的話，或許會出現(xiàn)色素呈油滴狀聚集等非特異性染色的情況。若想提高特異性，建議清洗后再觀察。

●  由于是不可逆性染色，染色后可更換培養(yǎng)基。染色后可在含有FBS培養(yǎng)基等的任意培養(yǎng)基中成像。

●  活細(xì)胞染色后，也可固定后觀察。還可以與免疫染色法組合使用。

    ※  本試劑不適用于固定后細(xì)胞的染色。染色請使用活細(xì)胞。

◆應(yīng)用實(shí)例

■  ERM的激發(fā)·熒光光譜

激發(fā)光譜（藍(lán)）和熒光光譜（綠）

※  適用于一般綠色熒光色素 FTIC 觀察條件

■  驗(yàn)證 ER 特異性

通過與各種細(xì)胞器標(biāo)記共染色評價本試劑的ER特異性。觀察到 ERseeing（100 nM）與現(xiàn)有的 Glibenclamide 系 ER 染色試劑高度共定位（Pearson 相關(guān)系數(shù) > 0.9）。另一方面，未觀察到與溶酶體標(biāo)記和線粒體標(biāo)記的共定位。高爾基體標(biāo)記觀察到部分共定位，可能是本試劑標(biāo)記的蛋白通過高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)，從 ER 轉(zhuǎn)移至分泌途徑。然而，添加 ER-Golgi 轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的話會減少與高爾基體的共定位。（詳情請參考原著論文）

■  評價細(xì)胞內(nèi)滯留性

向無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞內(nèi)添加 ERseeing 以及傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記 Glibenclamide，染色15 min 后進(jìn)行觀察（左）。然后，更換含有10%FBS的培養(yǎng)基再次觀察。熒光標(biāo)記 Glibenclamide 在清洗后熒光信號明顯消失了，但是由于 ERseeing 是不可逆染色的，清洗后也能觀察到很強(qiáng)的熒光信號。使用 ERseeing 進(jìn)行 ER 染色后，可以在含 FBS 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并進(jìn)行各種成像。